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Uma exposição permanente ocupa a Pinacoteca, com cerca de 500 obras, entre pinturas, esculturas, desenhos, gravuras e fotografias. Intitulada Arte no Brasil - Uma História na Pinacoteca de São Paulo, a mostra faz um panorama da arte brasileira do período colonial aos anos 1930.

Obras de grandes artistas integram o acervo do museu, como Debret, Taunay, Facchinetti, Almeida Junior, Eliseu Visconti, Pedro Alexandrino, Candido Portinari e Lasar Segall.

A exposição se estende por 11 salas. Outras quatro, localizadas nas extremidades do edifício, apresentam mostras temporárias que oferecem perspectivas sobre artistas, movimentos, períodos históricos, ou contrapontos contemporâneos, relacionadas à exposição de longa duração.